Бгкп колиформы в пищевых продуктах. Колиформные бактерии в воде. Термотолерантные колиформные бактерии

Санитарная микробиология

Рецензент: Зав. кафедрой эпидемиологии ПГМА,

© ГОУ ВПО «ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Росздрава»

1. Предмет санитарной микробиологии с3
2. Принципы и методы проведения санитарно-микробиологических исследований с3
3. Основные группы санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) с5
4. Санитарная микробиология воды с11
5. Санитарная микробиология почвы с14
6. Санитарная микробиология воздуха с15
7. Санитарно-микробиологические исследования в медицинских учреждениях с16
8. Тестовые задания с19

Санитарная микробиология – наука, изучающая микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека и экологическую ситуацию в различных биотопах. Главная задача практической санитарной микробиологии – раннее обнаружение патогенной микрофлоры во внешней среде. При этом следует помнить, что человек и теплокровные животные являются основным резервуаром возбудителей большинства инфекционных заболеваний и подавляющее число возбудителей передается с помощью аэрогенного и фекально-орального механизмов.

Началом развития санитарной микробиологии можно считать 1888 год, когда французский врач Е. Масе предложил считать кишечную палочку показателем фекального загрязнения воды.

Принципы проведения санитарно-микробиологических исследований

1. Правильный забор проб. Его проводят с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта. Соблюдается стерильность. При невозможности немедленного проведения анализа материал сохраняют в холодильнике не дольше 6-8 часов.
2. Серийность проводимых анализов. Большинство исследуемых объектов содержит самые разнообразные микроорганизмы, распределенные крайне неравномерно. Проводят забор серии проб из разных участков объекта. В лаборатории образцы смешивают, а затем точно отмеряют необходимое количество материала (обычно среднее по отношению к исследуемому материалу в целом).
3. Повторность отбора проб. Как правило, в исследуемых объектах состав микрофлоры меняется достаточно быстро, кроме того, патогенные микроорганизмы распределяются в них неравномерно. Соответственно повторный отбор проб позволяет получить более адекватную информацию.
4. Применение только стандартных методов исследования – дает возможность получать сравнимые результаты в различных лабораториях.
5. Использование комплекса тестов: прямых (выявляющих патогены) и косвенных.
6. Оценка объектов по совокупности полученных результатов – с учетом других гигиенических показателей (органолептических, химических, физических и т.д.)

Методы проведения санитарно-микробиологических исследований

Практическая санитарная микробиология использует два основных метода оценки санитарно-эпидемического состояния среды.

I. Методы прямого обнаружения возбудителя . Являются наиболее точными и надежными критериями оценки эпидемической опасности внешней среды. Основной недостаток – низкая чувствительность.

Трудность выделения патогенных микроорганизмов на питательных средах обусловливают следующие факторы:

1. Сравнительно низкое содержание патогенных микроорганизмов во внешней среде, составляющих 1/30000 всего видового состава микрофлоры внешней среды. Кроме того, она распределена неравномерно.
2. Выделение одного возбудителя не всегда свидетельствует о присутствии других видов патогенов. То есть, необходимо проводить исследования практически в отношении каждого патогена, что не осуществимо.
3. Изменчивость патогенов. Последние, попадая во внешнюю среду, приобретают новые свойства, затрудняющие их распознавание.
4. Конкурентные взаимоотношения между патогенами и сапрофитами при совместном выращивании на питательных средах.
5. Недостаточная элективность питательных сред и необходимость использования лабораторных животных и культур тканей.

II. Методы косвенной индикации возможного присутствия возбудителя во внешней среде.

Используют два критерия, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии возбудителя во внешней среде:

1. Общее микробное число (ОМЧ)
2. Содержание санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ)

- Общее микробное число (ОМЧ) определяют путем подсчета всех микроорганизмов в 1 грамме или 1 мл субстрата.

При этом исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен органическими веществами, тем выше ОМЧ и тем вероятнее присутствие патогенов. Однако, это не всегда так, так как ОМЧ может быть большим за счет сапрофитов, а патогены могут отсутствовать. Поэтому более адекватно расценивать ОМЧ как показатель интенсивности загрязнения внешней среды органическими веществами.

ОМЧ определяют двумя методами:

1. Прямой подсчет. Проводят под микроскопом с помощью специальных камер, например, Петрова или Горяева, либо специальных электронных счетчиков. Предварительно исследуемую пробу гомогенизируют и вносят краситель (обычно эритрозин). Можно проводить прямой подсчет и на мембранных фильтрах, через которые пропускают исследуемую жидкость или взвесь. Метод применяют в экстренных случаях. При необходимости срочного ответа о количественном содержании бактерий (например, при авариях в системе водоснабжения, при оценке эффективности работы очистных сооружений и др.). Основной недостаток – невозможность подсчитать бактерии, когда образуются их скопления или когда они «прилипают» к частицам исследуемого субстрата. Не удается подсчитать мелкие микроорганизмы, не говоря уже о вирусах. И, наконец, нельзя отличить живые от погибших микроорганизмов.
2. Количественный посев на питательные среды. Из приготовленных серийных десятикратных разведений исследуемой жидкости или суспензии по 1 мл переносят в стерильные чашки Петри и заливают расплавленным и остуженным до 45-50 0 С МПА. Равномерно смешивают жидкости и после застывания агара чашки помещают в термостат. После инкубации подсчитывают число выросших колоний и с учетом разведений высчитывают число жизнеспособных микробов в единице объема исследуемого объекта. При этом выявляются лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные бактерии, способные размножаться на МПА. Таким образом, получаемые цифры значительно ниже истинного количества микроорганизмов в исследуемом объекте.

-Санитарно-показательными называют микроорганизмы, по которым можно косвенно судить о возможном присутствии патогенов во внешней среде. Исходят из предположения, что чем больше объект загрязнен экстрактами человека и животных, тем больше будет санитарно-показательных микроорганизмов и тем вероятнее присутствие патогенов.

Основные характеристики СПМ:

1. Микроорганизм должен постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
2. Микроб не должен размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты), или размножаться незначительно.
3. Длительность выживания микроба во внешней среде должна быть не меньше, а даже больше, чем у патогенных микроорганизмов.
4. Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть аналогичной или превышать таковую у патогенных микроорганизмов.
5. У микроба не должно быть во внешней среде «двойников»или аналогов, с которыми их можно перепутать.
6. Микроб не должен изменяться во внешней среде, во всяком случае, в сроки выживания патогенных микроорганизмов.
7. Методы идентификации и дифференциации микроорганизмов должны быть простыми.

СПМ условно разделяют на 3 группы.

Между ними нет четко очерченных границ; некоторые микроорганизмы являются как показателями фекального, так и аэрогенного загрязнения. Все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения.

Группа А включает обитателей кишечника человека и животных; микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят так называемые бактерии группы кишечных палочек – БГКП. (для питьевой воды по новому нормативному документу - Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды. Методические указания МУК 4.2.1018-01 – данная группа называется общие колиформные бактерии ОКБ); БГКП – ОКБ, эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы; а также сульфит-восстанавливающие клостридии (включая Cl.perfringens ), термофилы, бактериофаги, синегнойная палочка, кандиды, ацинетобактеры и аэромонады.

Группа В включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки; микроорганизмы расценивают как индикаторы аэрогенного загрязнения. В нее входят альфа- и бета-гемолитические стрептококки, стафилококки (плазмакоагулирующие, лецитиназа-положительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые; в некоторых случаях определяют вид стафилококка – золотистый).

Группа С включает сапрофитные микроорганизмы, обитающие во внешней среде; микроорганизмы расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В нее входят бактерии-аммонификаторы, бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты и др.

Титр СПМ – наименьший объем исследуемого материала (в мл) или весовое количество (в гр), в котором обнаружена хотя бы одна особь СПМ.

Индекс СПМ – количество особей СПМ, обнаруженных в определенном объеме (количестве) исследуемого объекта. Для воды, молока и других жидких продуктов – в 1 л; для почвы, пищевых продуктов – в 1 г. Индекс – величина, обратная титру, поэтому перерасчет титра в индекс и обратно можно производить по формуле: Т=1000/И; И=1000/Т – для жидкостей. Соответственно для почвы и пищевых продуктов Т=1/И, И=1/Т.

Как дополнительный показатель в настоящее время также используют индекс наиболее вероятного числа (НВЧ), имеющий доверительные границы, в пределах которых может колебаться истинное количество искомого микроба с 95% вероятностью. Для определения НВЧ исследования проводят 3, 5, и 10 раз. Показатель определяют по специальным таблицам Хоскенса-Муре.

Основные группы СПМ

Бактерии группы кишечных палочек

Под общим названием «бактерии группы кишечных палочек» – БГКП – объединяются бактерии семейства Enterobacteriaceae, родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella. По новым нормативном документам, изданным после 2001 года, данная группа называется общие колиформные бактерии - ОКБ. Характеристика данных групп одинакова, к БГКП-ОКБ относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу и глюкозу до кислоты и газа при температуре 37 0 С за 24 часа и не обладающие оксидазной активностью. Использование двух названий одной и той же группы бактерий связано с применением нормативных документов различного года выпуска. Например, в действующем Приказе № 720 от 31 июля 1978 г. «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией» данная группа называется БГКП и в результатах исследований, проведенных в соответствии с данным Приказом, будет отмечено – БГКП обнаружены (не обнаружены). А при исследовании воды питьевой по методическим указаниям от 2001 года будет отмечено – ОКБ обнаружены (не обнаружены).

Escherichia coli

Микроорганизм является родоначальником всех СПМ. Это основной представитель группы ОКБ, в зависимости от цели и объекта исследования, в данной группе выделяют подгруппу ТКБ – термотолерантных колиформных бактерий.

Общие колиформные бактерии - ОКБ – грам-, оксидаза-, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до КГ при t 0 37 0 С в течение 24 часов.

Термотолерантные колиформные бактерии - ТКБ – входят в число ОКБ, обладают всеми их признаками, кроме того, способны ферментировать лактозу до КГ при t 0 44 0 С в течение 24 часов.

Как дополнительный тест используется определение ферментации глюкозы при различной температуре культивирования, поскольку известно, что ОКБ, выделяемые из хлорированной воды (водопроводной, плавательных бассейнов и др.), не способны вызывать сбраживание глюкозы с образованием газа при температуре 44 0 С.

Существенными недостатками E.coli как СПМ являются:

1. Обилие аналогов во внешней среде;

2. Недостаточная устойчивость к неблагоприятным воздействиям внешней среды, например, к различным химическим веществам и изменениям рН. В тоже время некоторые патогенные микроорганизмы, особенно энтеровирусы, к ним более устойчивы;

3. Высокая вариабельность, в результате чего вопросы ее экологии и диагностики не являются окончательно решенными;

4. Относительно короткое время выживания в пищевых продуктах, в то время как некоторые патогенные микроорганизмы (например, S.sonnei, S.schottmuelleri , энтеровирусы) сохраняются длительное время;

5. Кишечная палочка размножается в воде при содержании органических веществ не менее 280 мкг/л;

6. Кишечная палочка является нечетким индикатором. Например, известны вспышки сальмонеллеза водного происхождения при содержании возбудителей до 17 бактерий на 1 л, в то время как содержание E.coli не превышало 4 бактерий на 1 л, то есть оставалось почти нормальным.

Бактерии рода Enterococcus

В качестве СПМ предложены Хаустоном (1910). Род включает 16 видов, основные поражения у человека вызывают E.faecalis, E.faecium, E.durans. Эти бактерии отвечают целому ряду требований, предъявляемых к СПМ.

1. Энтерококки являются постоянными обитателями кишечника человека, несмотря на то, что в количественном отношении их меньше, чем кишечных палочек.

2. Бактерии практически не способны размножаться во внешней среде (температура должна быть 20 0 С и содержание органических веществ должно быть 375 мкг/л).

3. Энтерококки не проявляют выраженной изменчивости во внешней среде, что облегчает их распознавание.

4. Энтерококки не имеют аналогов во внешней среде.

5. Энтерококки отмирают во внешней среде значительно раньше, чем E.coli, поэтому они всегда свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении.

6. Самым главным достоинством энтерококков является их устойчивость к неблагоприятным внешним воздействиям. Энтерококки дифференцируют по тестам устойчивости Шермана.

а) Энтерококки устойчивы к нагреванию до 65 С в течение 30 минут, что делает их показателем качества термической обработки или пастеризации.

б) Энтерококки устойчивы к высоким концентрациям NaCl (6,5-17%) – СПМ при исследовании морской воды.

в) Энтерококки устойчивы к колебаниям рН (3-12), что позволяет использовать их в качестве индикатора фекального загрязнения в кислых и щелочных продуктах (сточные воды). В подобных условиях E.coli быстро теряет свои свойства и становится труднораспознаваемой.

По количеству и соотношению энтерококков и кишечных палочек судят о массивности и сроках фекального загрязнения.

Бактерии рода Proteus

Являются третьей (по значимости) группой СПМ. В качестве СПМ предложены еще в 1911 г. Род включает 4 вида; наибольшее значение имеют P.vulgaris, Р.mirabilis. При этом P.vulgaris обычно рассматривают как показатель загрязнения объекта органическими веществами (т.к. его чаще обнаруживают в гниющих остатках), а Р.mirabilis – как показатель фекального загрязнения (чаще обнаруживают в фекалиях). P.rettgeri чаще выявляют в испражнениях при кишечных инфекциях – поэтому его обнаружение свидетельствует об эпидемиологическом неблагополучии. Представители родаProteus дают характерный «ползучий» рост на средах Эндо и Левина, часто затягивающий всю чашку. Можно проводить выделение протея по методу Шукевича – посевом в конденсат свежескошенного МПА (у дна пробирки) – если в пробе имеется протей, затянет весь скос агара.

Присутствие протеев в воде, пищевых продуктах, смывах всегда свидетельствует о загрязнении объекта разлагающимися субстратами и о крайне неблагополучном санитарном состоянии. Пищевые продукты, загрязненные протеем, обычно выбраковывают; воду, содержащую протей, нельзя пить. Определение протеев рекомендовано при исследовании воды открытых водоемов, лечебных грязей. А при исследовании пищевых продуктов обнаружение протеев предусмотрено ГОСТ.

Clostridium perfringens

Как СПМ предложен еще в 1895 г., почти одновременно с E.coli . Уилсон и Блейр (1924-1925 гг) предложили железо-сульфитную среду, которая позволяет дифференцировать клостридии фекального происхождения от клостридий, обитающих во внешней среде. Кишечные клостридии восстанавливают сульфиты и вызывают почернение среды, а свободноживущие клостридии не имеют сульфит-редуктазы и не изменяют цвет среды. Почернение среды могут вызвать и некоторые другие микроорганизмы, поэтому для подавления роста сопутствующей микрофлоры рекомендуют посевы культивировать при 43-44,5 0 С или прогревать пробы при 80 0 С 15-20 минут. Т.о., Clostridium perfringens легко выделять и дифференцировать. Однако, у Clostridium perfringens как у СПМ есть определенные недостатки.

1. Палочка не всегда присутствует в кишечнике человека.
2. Clostridium perfringens длительно сохраняется во внешней среде за счет спорообразования. Поэтому обнаружение этого микроорганизма свидетельствует о некогда имевшем место фекальном загрязнении. Это индикатор возможного присутствия энтеровирусов.
3. Clostridium perfringens может размножаться во внешней среде (в некоторых видах почв). Для прорастания спор необходим «температурный шок», т.е. прогревание при 70 0 С 15-30 минут.

В настоящее время о давности фекального загрязнения объекта предложено судить по сопоставлению количества споровых и вегетативных форм Clostridium perfringens. С этой целью определяют количество клостридий в прогретых и непрогретых пробах.

А) В прогретых пробах индекс будет представлен только споровыми формами, свидетельствующими о давнем загрязнении (в свежих фекалиях 80-100% составляют вегетативные клетки).

Б) В непрогретых пробах выявляют вегетативные и споровые формы.

Количественный учет клостридий предусмотрен при исследовании почвы, лечебных грязей, воды открытых водоемов.

Clostridium perfringens не должны обнаруживаться в 100 мл воды на предприятиях пищевой промышленности. Определение микроба проводят и в некоторых пищевых продуктах, но уже как возможного возбудителя пищевых отравлений. Критический уровень Clostridium perfringens в готовых блюдах равен 10 клеток в 1 мл или 1 г продукта. Готовые консервы не должны содержать Clostridium perfringens.

По соотношению количеств кишечной палочки, энтерококков и клостридий судят о давности фекального загрязнения.

Бактерии рода Salmonella

Являются наиболее распространенными возбудителями ОКЗ и поэтому могут быть индикаторами возможного присутствия других возбудителей инфекций с аналогичным патогенезом и эпидемиологией.

В последние десятилетия сальмонеллы широко распространены во внешней среде. Увеличилось число лиц – бактерионосителей (до 9,2%), выделяющих во внешнюю среду миллионы и миллиарды клеток с каждым граммом фекалий, носительство у животных еще более выражено. В сточных водах мясоперерабатывающих предприятий сальмонеллы обнаруживают в 80-100% проб, в очищенных сточных водах – в 33-95% образцов; бактерии обнаруживают также в хлорированных сточных водах.

Особенности сальмонелл как СПМ

1. Эти микроорганизмы попадают во внешнюю среду только с фекалиями человека и животных. Их обнаружение всегда свидетельствует о фекальном загрязнении.
2. Сальмонеллы не размножаются в почве; в воде они размножаются лишь при высокой температуре и высоком содержании органических веществ.
3. При определении сальмонелл следует определять не только процент положительных находок, но и НВЧ. Только НВЧ позволяет прогнозировать подъемы сальмонеллезов и других ОКЗ со сходной этиологией.

Вирусы бактерий

В качестве СПМ предлагают использовать бактериофаги кишечных бактерий (эшерихий, шигелл, сальмонелл). Кишечные фаги постоянно обнаруживают там, где есть бактерии, к которым они адаптированы. Однако как показатели возможного присутствия патогенных бактерий они имеют некоторые недостатки. Например, бактериофаги выживают во внешней среде дольше (8-9 месяцев), чем соответствующие бактерии (4-5 месяцев). Но как показатели фекального загрязнения бактериофаги имеют существенную ценность.

1. Бактериофаги выделяют из сточных вод с той же частотой, что и многие патогенные вирусы (полиомиелита, Коксаки, гепатита А).

2. Сходство с энтеропатогенными вирусами дополняет устойчивость к дезинфектантам.

3. Методы обнаружения фагов довольно просты. Посевы производят в бульон с индикаторной бактериальной культурой. После инкубирования делают пересевы на плотный агар, сравнивают КОЕ в опыте и контроле и делают выводы.

Бактерии рода Staphylococcus

Стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры. Основным местом их локализации служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей человека и некоторых теплокровных животных, а также кожные покровы. Присутствуют стафилококки и в кишечнике здоровых людей. В окружающую среду стафилококки попадают при разговоре, кашле, чихании, а также с кожи. Загрязнение воды водоемов и бассейнов происходит при купании людей, при этом в бассейнах число стафилококков может достигать десятков тысяч в 1 л воды. С распространением стафилококков в окружающей среде тесно связана проблема внутрибольничных инфекций стафилококковой природы, которая связана с носительства патогенных стафилококков у людей, особенно среди медицинского персонала. Все это позволяет отнести стафилококки к бактериям-индикаторам воздушно-капельного загрязнения.

Стафилококки относятся к семейству Micrococcaceae, роду Staphylococcus. Вид S.aureus относится к патогенным.

Как санитарно-показательные микроорганизмы стафилококки имеют некоторые особенности:

1. Они неприхотливы к питательным средам, методы индикации их в окружающей среде проще, чем, например, у стрептококков
2. Стафилококки обладают значительной устойчивостью к различным физическим и химическим факторам воздействия. Исходя из резистентности стафилококков к дезинфицирующим веществам (особенно препаратам хлора), предложено применять их в качестве СПМ загрязненности воды в зонах рекреации водоемов (в том числе морских), плавательных бассейнов.
3. Являются объективным показателем загрязнения воздуха закрытых помещений, поскольку показана корреляция между санитарно-гигиеническим сосоянием помещений, количеством находящихся в них людей, числом носителей патогенных стафилококков и содержанием стафилококков в воздухе.

Бактерии рода Streptococcus

Стрептококки, также как и стафилококки, являются обитателями верхних дыхательных путей человека и многих животных. Они постоянно и в больших количествах присутствуют в полости рта и носоглотке больных с хроническими стрептококковыми инфекциями верхних дыхательных путей, а также здоровых людей и поэтому могут попадать в воздух помещений с бактериальным аэрозолем при разговоре и кашле.

Основная трудность использования стрептококков в качестве санитарно-показательных микроорганизмов заключается в том, что стрептококки представляют обширную группу, объединяющую большое количество видов: от сапрофитов до патогенных стрептококков, вызывающих такие заболевания, как скарлатина, рожистое воспаление, сепсис и многие гнойно-воспалительные процессы.

Стрептококки относятся к семейству Streptococcaceaе, роду Streptococcus. Вид S.pyogenes имеет наибольшее значение в патологии человека.

В окружающей среде стрептококки представлены в основном α-гемолитическими стрептококками (не полностью разрушают эритроциты, образуют зеленоватые зоны вокруг колоний). Это обусловлено тем, что почти у 100% здоровых людей на поверхности миндалин находятся α-гемолитические стрептококки, в то время как β-гемолитические стрептококки (вызывают лизис эритроцитов и образуют зону гемолиза) – только у 25-75%.Принято целесообразным считать санитарно-показательными микробами воздуха суммарно α- и β-гемолитические стрептококки.

Особенности стрептококков как СПМ:

1. Стрептококки не очень устойчивы в окружающей среде, они могут сохраняться только в течение нескольких дней в пыли помещений, на белье, предметах обихода больного. Однако сроки сохранения их жизнеспособности близки к продолжительности жизни ряда патогенных бактерий, попадающих в окружающую среду воздушно-капельным путем (например, таких как возбудитель дифтерии и др.)
2. Показателем более свежего загрязнения воздуха помещений является α-гемолитический стрептококк как наименее устойчивый. В воздухе необитаемых человеком помещений стрептококки не обнаруживаются.
3. Методы индикации и идентификации стрептококков более сложны и трудоемки в сравнении с таковыми стафилококков.

Термофилы

Особое место среди СПМ занимают термофильные микробы, присутствие которых в почве или воде водоемов свидетельствует о загрязнении их навозом, компостом или разложившимися фекалиями людей.

К термофильным микроорганизмам относятся грамположительные бактерии, кокки, бациллы, спириллы, актиномицеты, немногие виды грибов, которые способны активно размножаться при температуре 60 0 С и выше. Большая часть термофилов – аэробы.

Термофильные микроорганизмы размножаются в компостных кучах и навозе, в которых благодаря их жизнедеятельности происходит нагревание до 60-70 0 С поверхностных слоев. В таких условиях идет процесс биотермического обезвреживания органических масс, подвергающихся самонагреванию, погибают патогенные микроорганизмы и кишечные палочки.

Таким образом, присутствие термофилов свидетельствует о давнем загрязнении почвы компостами, при этом БГКП (ОКБ) обнаруживаются в незначительных количествах. И, напротив, высокий титр БГКП (ОКБ) при малом числе термофилов – показатель свежего фекального загрязнения.

Термофилы служат также санитарно-показательными микроорганизмами для характеристики отдельных этапов процесса минерализации органических отходов.

Анализ лекарственных средств группы бензолсульфониламидов

Анализ лекарственных средств группы бензолсульфониламидов. В контрольно-аналитической лаборатории проводилось установление содержания сульфадиметоксина в таблетках методом нитритометрии

Анализ лекарственных средств из группы солей алифатических карбоновых кислот и оксикислот, кислоты аскорбиновой, алифатических аминокислот и их производных

Cтраница 1

Присутствие колиформных бактерий также определяют в воде всех видов. Термотолерантные колиформные бактерии быстро отмирают во внешней среде, поэтому их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.  

Для определения колиформных бактерий в питьевой воде и воде очищенной используют метод мембранных фильтров. Подсчитывают количество выросших на фильтрах лактозоположительных колоний, идентифицированных как колиформные бактерии.  

При отсутствии общих колиформных бактерий проводится определение глюко-зоположительных колиморфных бактерий (БГКП) с постановкой оксидазного теста.  

Например, основной показатель фекального загрязнения - колиформные бактерии, их определение проводят в смывах с рук, спецодежды персонала, лабораторной посуды, в нестерильных лекарственных формах, инъекционных растворах и глазных каплях до стерилизации. Воздух оценивают по содержанию золотистого стафилококка, попадающего в него из верхних дыхательных путей, ротовой полости. Его считают показателем капельного загрязнения воздуха. Другими микробами, отражающими санитарное неблагополучие того или иного объекта, являются дрожжевые и плесневые грибы, синегнойная палочка, сальмонеллы.  

Эффективность процесса дезинфекции определяется анализом на группу колиформных бактерий, являющихся индикаторами качества воды. Чувствительность бактерий к хлорированию хорошо известна, в то время как влияние хлорирования на простейшие и вирусы прослеживается не совсем четко. Личинки простейших и кишечные вирусы более устойчивы к действию хлора, чем колиформы и другие кишечные бактерии. Однако имеется очень мало данных, свидетельствующих о том, что существующая практика обработки воды несовершенна. Документально не были зафиксированы вспышки болезней, связанных с употреблением воды, содержащей вирусные или протозойные инфекции.  

Приведенные данные показывают насколько статистически значителен рост содержания колиформных бактерий.  

При определении качества воды необходимо вычислить количество присутствующих колиформных бактерий, чтобы определить, отвечает ли вода установленным стандартам. Для подсчета положительных колиформных анализов (предположительных, подтверждающих и фекальных) используется множество бродильных трубок. При подсчете применяют метод статистической обработки результатов анализов, проводимых с последовательным разбавлением пробы. Например, НВЧ 10 означает, что на 100 мл воды приходится 10 колиформных бактерий.  

Естественное очищение приводит к уменьшению мутности, цветности и содержания колиформных бактерий, а также к устранению суточных колебаний в качественных показателях. С другой стороны, рост водорослей может привести увеличению мутности и к образованию летом и осенью трудноудалимых привкусов и запахов. Хлорирование может быть как предварительной, так и последней (вторичной) стадией обработки воды, обеспечивая дезинфекцию сырой воды и установление должной концентрации остаточного хлора в очищенной воде. Интенсивное предварительное хлорирование и обработка воды активным углем применяются для удаления из воды соединений, вызывающих привкусы и запахи. Специальные химические соединения, используемые при коагуляции, выбирают в зависимости от свойств воды и на основании экономических соображений. Речная вода обычно требует обширного комплекса очистных сооружений, обладающего большой эксплуатационной гибкостью из-за суточных колебаний качественных показателей воды. Подготовительная стадия обработки часто заключается в предварительном отстаивании, уменьшающем количество ила и осаждаемых органических веществ перед химической очисткой. Как показано на рис. 7.2, на многих сооружениях, обрабатывающих речную воду, в целях достижения большей степени очистки и гибкости работы сооружений химическую коагуляцию и осаждение проводят в два этапа. В зависимости от тех или иных факторов для получения удовлетворительного качества очищенной воды может использоваться до двенадцати различных химических соединений.  

При санитарной оценке качества подземных вод отсутствие в составе воды колиформных бактерий обычно считалось признаком отсутствия и патогенных.  

Почти во всех штатах теперь требуется проведение анализа обработанной воды на колиформные бактерии; в этом случае число требуемых анализов зависит от численности обслуживаемого населения. Подсчет фекальных колиформ, хотя он обычно необязателен с точки зрения контролирующих органов, несложен и может дать дополнительную ий-формацию относительно источников загрязнения. Иногда применительно к конкретной установке специально устанавливают предельные значения некоторых показателей, таких, как концентрация остаточного хлора, мутность, содержание растворенных твердых частиц, нитратов, а также цветность. Концентрацию остаточного хлора в распределительной системе измеряют для того, чтобы определить, является ли достаточным хлорирование. Другие лабораторные анализы связаны с контролем химической обработки, выявлением и устранением некоторых проблем, возникающих в сооружениях распределительной системы, и с жалобами потребителей на качество воды. Химические реагенты должны отвечать требованиям соответствующих технических условий, и их следует подвергать традиционным анализам, причем при отклонении от технических условий на поставщика необходимо накладывать штраф. Например, известь обычно покупают с содержанием СаО 88 - 90 %, квасцы - с 17 % - ным содержанием А12Оз, а активный уголь - по спецификациям относительно содержания фенола. Если в контракте на поставку химических веществ предусмотрено наложение штрафов на поставщика на основании результатов лабораторных анализов, то это может оградить водоочистную установку от поступления в нее недоброкачественных материалов.  

БГКП. К бактериям группы кишечных палочек (колиформных) относят роды Escherichia (типичный представитель E. coli ), Citrobacter (типичный представитель C. colicitrovorum ), Enterobacter (типичный представитель E. aerogenes), которые объединены в одно семейство Enterobacteriaceae благодаря общности свойств.

Общая хар-ка БГКП : - палочки грамм-отрицательные, короткие; - не спорообразующие; - на среде Энда дают красные колонии с металлическим блеском - E.coli , красные – энтеробактерии, розовые – цитробактерии, б/цв – лактозо – отрицательные.Биохимические свойства. Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других сахаров, а также спиртов. Не обладают оксидазной активностью. Устойчивость. Бактерии группы кишечных палочек обезвреживаются обычными методами пастеризации (65-75°С). При 60°С кишечная палочка погибает через 15 минут. 1% раствор фенола вызывает гибель микроба через 5-15 минут.Санитарно-показательное значение. Бактерии рода Escherichia – постоян. обитатели кишечника чел и животн, и обнаружение их в воде и ПП свидетельств о свежем фекальном загрязнении. Бактерии родов Citrobacter и Enterobacte r могут находиться повсюду: в почве, на растениях, реже в кишечнике. Считают, что они предст собой результат изменен ишерихий после пребывания их во внешней среде и поэтому являются показателями более давнего фекального загрязнения. Значение БГКП:

В сыром молоке указывает - на на эпидемиологическую опасность

Через несколько часов при 8-10 о С - о нарушении условий хранения и реализации, транспортиров.

Появл. БГКП после пастеризации расценивают как 2-ое загрязнение

Наличие БГКП в готовой продукции указывает на - плохую мойку и дезинфекцию оборудования.

Род Salmonella . Сальмонеллезы относятся к числу наиболее распространенных токсикоинфекций. Обнаруж сальмонелл всегда свидетельствует о фекальном загрязнении. Сальмонеллы устойчивы к высоким концентрациям поваренной соли (особенно в средах, содержащих белок) и высушиванию. Сохраняют свою жизнеспособность в комнатной пыли, в различных почвах (97 мес.), в воде открытых водоемов (до 45 дн). Находясь в ПП, особенно в мясных, сальмонеллы очень устойчивы к тепловой обработке. Соление и копчение мяса оказывают слабое воздействие на сальмонелл. При размножении сальмонелл в молоке его внешний вид и вкус не изменяются, пастеризация молока в течение 30 мин при 85ºС в производственных условиях способствует полному уничтожению этих бактерий. Человек заражается сальмонеллами в результ употребл мяса и мясопродуктов. Молоко и молочные продукты гораздо реже явл причиной пищевых отравлений. Инфицирование молока главным образом происходит через загрязненную посуду, доильные аппараты, руки доильщиц и др. Возбудители сальмонеллезов могут попасть в ПП, изготовленные из растительного сырья (салаты и соусы столовые) не только в процессе производства, но и с пищевыми ингредиентами, в частности с сухими овощными приправами и специями.

Идентификация БГКП:

● Посев на среду обогащения - Кесслер, одновременная идентификация по газообразов.: есть газообразование - возможно БКГП, нет газообразования - нет БГКП

● Идентификация БГКП на среде Эндо: Из газ(+) пробирок отбирают по 1 мл и сеют на тв.среду Эндо, идентифицируют колонии БГКП по цвету, проводят дифференциацию по родам в зависимости от цвета колоний: Если есть красные, розовые и бледно-розовые культуры - значит присутствуют БГКП, если нет колоний – нет БГКП. Если есть колонии, но бесцветные - подозрение на патогены. Далее по цвету идентифицируют роды БГКП: 1) красные - с металлич. оттенк. – эшерихия 2) розовые – энтеробактер 3) бледно-розовые - со слизью – клебсиела 4) бледно-розовые - цитробактер, церрации 5) бесцветные (лактозо (-)) - протей 6) прозрачные мелкие – патогенны

● Идентификация на среде Козера: выращивание на среде с глюкозой/лимонной кислотой, Т=43°С,24ч. М/о цитрат(+) меняют цвет красителя с зеленого на васильковый. М/о цитрат(-) не меняют цвет.

Определяют по количеству положительных проб в 3 пробирках.

Сальмонеллы – патогенны, анализируют в 25 г продукта, их там не должно быть. Служат индикатором патогенов.

Выявление сальмонелл проводится в 4 этапа

1) первичный (прямой) посев - Посев на среду Энда и Плоскирава на сутки и Т=37 0 С. На ср. Энда – прозрачные колонии,

2) обогащение (посев на жидкие селективные среды, термостатирование)

3) посев со среды обогащения осущ после обогащения на плотные диагностические среды, термостатирование - на ср. Плоскирава- прозрачные,но более мелкие чем на среде Эндо

4) подтверждение путем установления ферментативных и серологических свойств сальмонелл

©2015-2019 сайт
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-04-20

Оглавление темы "Санитарно-микробиологическое исследование почвы. Микрофлора водоемов.":

Между группами санитарно-показательных микроорганизмов нет чётко очерченных границ. Некоторые микроорганизмы являются показателями как фекального, так и орального загрязнения. Некоторые - показателями процессов самоочищения. В связи с этим все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения.

Группа А санитарно-показательных микроорганизмов . Включает обитателей кишечника человека и животных. Микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят БГКП - эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы. Также в группу А включены сульфитвосстанавливающие клостридии (Clostridium petfringens и др.), термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойная палочка, кандиды, акинетобактеры и аэромонады.

Группа В санитарно-показательных микроорганизмов . Включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. Микроорганизмы расценивают как индикаторы орального загрязнения. В неё входят зеленящие, а- и (3-стрептококки, стафилококки (плазмокоагулирующие, лицитиназа-положительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые; в некоторых случаях также определяют вид золотистого стафилококка).

Группа С санитарно-показательных микроорганизмов . Включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде. Микроорганизмы расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В неё входят бактерии-протеолиты, бактерии-аммонификаторы и бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, бделловибрионы и сине-зелёные водоросли.

Основные группы санитарно-показательных микроорганизмов

К основным санитарно-показательным микроорганизмам относят БГКП, энтерококки, протеи, сальмонеллы, Clostridium perfringens, термофильные бактерии и бактериофаги энтеробактерий (колифаги).

Бактерии группы кишечной палочки

Кишечная палочка положила начало всей группе СПМ. В состав БГКП включены различные представители семейства Enterobacteriaceae. В зависимости от цели и объекта исследования к санитарно-показательным БГКП предъявляют различные требования. Их условно разделяют на три подгруппы и при различных обстоятельствах используют факт их наличия для бактериологической характеристики объекта или субстрата.

Подгруппа I кишечной палочки включает БГКП, которые пытаются выявить, но которых не должно быть при исследовании объектов и субстратов, «чистых» по своей природе или ставших чистыми в результате их обработки (например, термической). В группу объектов, обладающих такими свойствами, входят следующие. Питьевая (артезианская, водопроводная хлорированная, колодезная) и дистиллированная вода (взятая из дистиллятора или трубопровода). Термически обработанные пищевые продукты (котлеты, колбасы, рыба и т.д.). Анализируют пробы, отобранные из толщи продукта.

Молоко (взятое из пастеризатора до поступления в молокопроводы), супы, соусы, компоты, вторые блюда (отобранные из котлов). Смывы, отобранные при проведении контроля эффективности дезинфекционной обработки в положенные сроки (не ранее 45 мин и не позднее 1 ч после обработки).

Бактерии этой подгруппы кишечной палочки ферментируют лактозу и глюкозу или только глюкозу до газа при 37 °С и не проявляют оксидазную активность. В эту подгруппу входят Escherichia га//, клебси-еллы, цитробактеры, энтеробактеры и другие представители семейства Enterobacteriaceae. Их наличие допускается в объектах, не относящихся к разряду «чистых».

Подгруппа II кишечной палочки включает БГКП, указывающие на неопределённое по времени фекальное загрязнение. Микроорганизмы сбраживают лактозу и глюкозу до кислоты и газа при 43-44,5 °С. В эту подгруппу входят бактерии (Е. coli, клебсиеллы, цитробактеры, энтеробактеры и др.), сохранившие способность к газообразованию при повышенном температурном режиме. Подобные требования предъявляют к БГКП при невозможности уберечь субстрат от загрязнения. При этом следует ограничиться определением лишь показателей эпидемиологического неблагополучия. К таким объектам относят: воду открытых водоёмов, сточные воды, почву и все пищевые продукты, для которых высок риск обсеменения после термической обработки. В подобных случаях исследуют твёрдые пищевые продукты (поверхностный слой), жидкие пищевые продукты, вторые и третьи блюда на раздаче, смывы с оборудования и посуды. Посевы культивируют при 43-44,5 °С. Е. coli дифференцируют от других бактерий по способности ферментировать лактозу и глюкозу или только глюкозу.

Подгруппа III кишечной палочки включает БГКП, указывающие на свежее фекальное загрязнение. Отличительная особенность бактерий этой группы - способность расщеплять лактозу до газа при 43-44,5 "С.

Сегодня, когда здоровье стало не только необходимостью, но и модным брендом, мы все больше внимания уделяем правильному питанию и физическим нагрузкам. Но очень часто забываем, что наше самочувствие во многом определяется водным балансом организма. И тут важно не только, сколько воды мы пьем, но и какую. В определении качества воды уже давно нашими помощниками стали колиформные бактерии. Этот живой индикатор качества питьевой воды легок в обнаружении и подсчете и применяется в микробиологическом анализе. Бактерий в питьевой воде быть не должно - это факт. А вот о колиформных бактериях в питьевой воде мы знаем мало.

Армия их неисчислима

По форме клетки бактерии бывают как шарики (кокки) и палочки (бациллы), спиральки (спириллы) и изогнутые (вибрионы). Автотрофные бактерии сами синтезируют органические вещества из неорганических (фотосинтетики и хемосинтетики). Но их меньшинство. Большая часть бактерий - гетеротрофы, среди которых выделяют сапротрофов (используют органические вещества продуктов жизнедеятельности и отмершие части живых организмов) и симбионты (используют органические вещества живых организмов или их продукты жизнедеятельности). Симбионты человека называются энтеробактериями, и интересующие нас колиформные бактерии именно такие.

Кто же это?

В условно выделенную по морфологии и культуре группу колиформных бактерий объединяют представителей родов Escherichia , Citrobacter, Enterobacter и Klebsiella, которые используются в санитарной микробиологии как маркеры попадания потенциально опасных микроорганизмов на объекты внешней среды. Простым языком - это бактерии группы кишечной палочки, то есть все, что похожи на кишечную палочку (Escherichia coli ). Это грамотрицательные (чисто микробиологическая характеристика по отношению организмов к способности окрашиваться или нет в мазках) палочки, которые живут в нижних отделах кишечника человека и многих теплокровных животных (домашние скот и птица). В воде они оказываются с фекальными стоками и могут служить маркерами ее загрязнения.

Биохимические характеристики

Все бактерии группы кишечной палочки обладают способностью к ферментации лактозы, но делают это при разных температурных показателях. Выделяют две группы бактерий:

• Общие колиформные бактерии. Сбраживают углеводы в температурном интервале 35-37°C.
• Фекальные или термотолерантные колиформные бактерии. Сбраживание углеводов происходит при 44,0-44,5°C.

Это разделение важно при проведении микробиологического анализа. В питьевой воде общих колиформных бактерий быть не должно. Допускается их попадание в распределительные системы подачи питьевой воды, но не более чем в 5% проб, взятых в течение 12 месяцев. Кроме того, при обнаружении общих колиформных бактерий в воде обязателен тест на присутствие термотолерантных видов.

Насколько они опасны

Среди всех представителей колиформных бактерий условно-патогенными считаются представители 15 видов различных родов. Среда их обитания - нижние отделы кишечного тракта человека и животных. Это не одно и то же, что патогенные бактерии. Такие организмы всегда присутствуют в микрофлоре пищеварительного тракта, многие их них помогают организму усваивать и синтезировать витамины, разлагать белки и углеводы. Патогенными (вызывающими заболевания) они могут стать при изменении условий среды, что приведет к их избыточному размножению. Такими причинами может стать снижение иммунитета, гибель нормальной микрофлоры после приема лекарств, угнетение защитных свойств слизистых оболочек и многое другое. Но не факт, что человек, выпивший воды, даже содержащей данные микроорганизмы, заболеет.

А нам это надо?

Выявить колиформные бактерии в питьевой воде не так просто - их не почувствуешь на вкус и не увидишь. Но тем, кто строит дом или хочет купить смягчитель воды, желательно проверить воду на их наличие. Далее в таблице даны нормативы для воды центрального водоснабжения, но стоит учесть, что даже в обычном кулере могут обнаружиться бактерии.

Кроме данных показателей, бактериологический анализ оперирует и другими стандартами. Но важно одно - бактерий в воде быть не должно. А их обнаружение чревато эпидемиями и массовым заражением патогенными формами. В России и странах Таможенного союза действуют нормы для содержания в пищевых продуктах и воде колиформных бактерий в соответствии с ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевых продуктов» и других нормативных актов.

Если вы решили сдать воду на анализ

Прежде всего, ознакомьтесь с правилами забора проб (стерильная емкость, личная гигиена перед отбором проб, которые действительны в течении двух часов). Это важно - а ведь это показатель чистоты анализа. В лаборатории проведут посевы на различные среды (агар или бульон), где вырастут разноцветные колонии бактерий (именно по их цвету и форме проходит определение колиформных бактерий) и подсчитают количество микроорганизмов в пробе. Но колиформы в образцах имеют различное санитарное и эпидемиологическое значение. Так, представители рода Escherichia показывают совсем недавнее заражение воды фекальными стоками. Присутствие Citrobacter или Enterobacter показывают загрязнения, произошедшие в течении нескольких недель.

Способы устранения бактерий из воды

Для устранения колиформных бактерий существует всего два способа: дезинфекция и обеззараживание. В первом случае воздействие на бактерии химическое, во втором - физическое, а именно:

• термообработка;
• воздействие сильных окислителей (хлор, гипохлорит натрия);
• олигодинамия (воздействие ионов серебра и золота);
• использование ультразвука, радиоактивного излучения, ультрафиолета.

Дезинфекция сточных вод проводится с помощью элементов, содержащих хлор. В таких случаях обязательно проведение доочистки для удаления излишков хлорсодержащих элементов, негативно влияющих на организм человека. Обеззараживание помощью ультрафиолетовых излучателей воздействует только на бактерии и не оставляет следов в воде. Для дезинфекции применяют и озон - концентрированный жидкий кислород. Этот способ дорогостоящий и трудный в производстве, но за ним будущее. Он полностью экологичен и не оставит следов в воде, которую мы пьем. Ранее популярный метод обеззараживания - йодирование - сегодня применяется лишь кратковременно и в областях, где содержание йода в окружающей среде ниже норм.

Профилактические мероприятия

Пути попадания в наш организм патогенных колиформных штаммов - фекальный и оральный. Для обеспечения личной безопасности важно соблюдать очень простые правила:

• Не употреблять в пищу немытые овощи, зелень, фрукты, ягоды.
• Тщательно следить за соблюдением личной гигиены.
• Не применять воду, не прошедшую соответствующую очистку. В том числе и для полива сельскохозяйственных культур. Кстати, опытные садоводы и огородники даже дождевую воду не применяют для полива.
• Прямыми путями заражения является употребление воды и молока, которые не прошли термическую обработку. При кипячении (100°C) в течение минуты большая часть бактерий погибает.
• Осторожное купание в озерах и других водоемах со стоячей водой. Именно они относятся к группе риска по развитию условно-патогенной флоры. Исключение составляют только океаны - высокая солёность почти полностью обеззараживает их воду.

Кстати, популярные сегодня среди населения кулеры далеко не так безопасны. Чем большее количество людей ими пользуется, тем выше вероятность обнаружения в воде различных организмов - как безвредных, так и патогенных.

Подводя итог

Бактерий в нашей питьевой воде быть не должно. Никаких. И не только потому что они могут стать причиной серьёзных расстройств желудочно-кишечного тракта, вплоть до летального исхода. Не должно в ней быть и условно-патогенных колиформных бактерий, которые сегодня используются как маркеры загрязнения воды органикой, фекалиями и прочим. Именно поэтому государственными структурами ведется контроль и мониторинг за состоянием не только воды наших систем подачи, но и воды водоемов и подземных источников. А целью каждого, кто заботится о своем здоровье и здоровье своих близких должно стать соблюдение личных правил гигиены, техники безопасности при использовании воды для питья и мытья посуды. Берегите себя и будьте здоровы!